數(shù)字PCR是近年來迅速發(fā)展起來的一種定量分析技術(shù)。與傳統(tǒng)定量PCR技術(shù)不同的是數(shù)字PCR不依賴于擴(kuò)增曲線的循環(huán)閾值(CT)進(jìn)行定量,不受擴(kuò)增效率的影響,也不必采用看家基因和標(biāo)準(zhǔn)曲線,具有很好的準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性,可以實(shí)現(xiàn)定量分析。迄今為止,已有Fluidigm、Bio-Rad等相繼推出了數(shù)字PCR儀器，已經(jīng)在單細(xì)胞分析、癌癥早期診斷和產(chǎn)前診斷等研究領(lǐng)域顯示出巨大的技術(shù)優(yōu)勢(shì)和應(yīng)用前景。
PCR實(shí)際上是一個(gè)在模板DNA、引物(模板片段兩端的已知序列)和四種脫氧核苷酸等存在的情況下，DNA聚合酶依賴的酶促合成反應(yīng)，擴(kuò)增的特異性取決于引物與模板DNA的持異結(jié)合。
整個(gè)擴(kuò)增過程分三步：
1、變性：使DNA雙鏈解離，形成兩條單鏈；
2、退火：溫度下降后模板DNA與引物按氨堿基配對(duì)原則互補(bǔ)結(jié)合，也可能存在兩條模板鏈之間的結(jié)合，但由于引物的高濃度、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單等特點(diǎn)，結(jié)合主要發(fā)生在模板與引物之間；
3、延伸：在DNA聚合酶及鎂離子等存在的條件下，從引物的3"端開始，結(jié)合單核苷酸，形成與模板鏈互補(bǔ)的新DNA鏈。上述幾步為一個(gè)循環(huán)，從理論上講，每經(jīng)過1個(gè)循環(huán)，樣本中的DNA應(yīng)該增加一倍，新形成的鏈又可成為新一輪循環(huán)的模板。第2個(gè)循環(huán)開始后，模板鏈增加—倍。經(jīng)過25—30個(gè)循環(huán)后DNA可擴(kuò)增10的6次方至9次方倍。
